Методы определения холестерина

Содержание
  1. Методы определения общего холестерина в крови
  2. Принцип
  3. Нормальные величины
  4. Что такое холестерин: как определить и снизить его концентрацию в крови
  5. Информация к сведению
  6. Виды стеринов
  7. Значение холестерина
  8. Этиология гиперхолестеринемии
  9. Симптоматика болезни
  10. Профилактика
  11. Заключение
  12. Анализ крови на холестерин — как правильно подготовиться
  13. Холестерин и его фракции: биологическая роль в организме
  14. Подготовка к лабораторному исследованию крови
  15. Биохимический анализ крови: основные показатели здоровья
  16. Способы измерения в сыворотке крови
  17. Портативный биохимический анализатор – экспресс-метод диагностики
  18. Лабораторные методы определения
  19. Измерение уровня свободного холестерина
  20. Липидограмма – расширенный анализ жирового обмена
  21. Общий холестерин и его фракции
  22. Медицинская биохимия, принципы измерительных технологий в биохимии, патохимия, диагностика, биохимия злокачественного роста. Часть 2
  23. Page 3

Методы определения общего холестерина в крови

Методы определения холестерина

Холестерин — одноатомный спирт, в молекуле которого имеется ядро циклопентанпергидрофенатрена.

Он является компонентом клеточных мембран, предшественником при синтезе желчных кислот, стероидных гормонов (глюкокортикоидов, альдостерона, половых гормонов), витамина D, обнаруживается во всех тканях и жидкостях организма как в свободном состоянии, так и в виде эфиров с жирными кислотами, преимущественно с линолевой (около 10% всего холестерина). Синтез холестерина происходит во всех клетках организма. Основными транспортными формами в крови являются α‑, β‑ и преβ‑липопротеины (или, соответственно, липопротеины высокой, низкой и очень низкой плотности). В плазме крови холестерин находится главным образом в форме сложных эфиров (60‑70%). Эфиры образуются либо в клетках в реакции катализируемой ацил-КоA-холестерин-ацилтрансферазой, использующей в качестве субстрата ацил‑КоA, либо в плазме в результате работы фермента лецитин-холестерин-ацилтрансферазы, осуществляющей перенос жирной кислоты со второго атома углерода фосфатидилхолина на гидроксильную группу холестерина. В плазме крови главными источниками холестерина и фосфатидилхолина для реакции служат липопротеины высокой и низкой плотности, этим путем образуется большая часть эфиров холестерина плазмы.

Для определения содержания холестерина в крови используют следующие методы:

  1. Титрометрические.
  2. Гравиметрические.
  3. Нефелометрические.
  4. Тонкослойная и газожидкостная хроматография.
  5. Полярографические методы, позволяют определять общий и свободный холестерин в присутствии ферментов холестеролоксидаз и холестеролэстераз.
  6. Флюориметрия по реакции с о‑фталевым альдегидом и другими реактивами.
  7. Ферментативные методы — определение протекает в одной пробирке, но в несколько этапов: ферментативный гидролиз эфиров холестерина, окисление холестерина кислородом воздуха с образованием холест‑4‑ен‑3‑ола и перекиси водорода. В качестве ферментов применяются холестеролоксидаза, холестеролэстераза, пероксидаза, каталаза. Ход реакции можно регистрировать:
  • спектрофотометрически по накоплению холестенола.
  • по убыли кислорода в среде.
  • по изменению окраски раствора, в качестве хромогенов — индикаторов протекания реакций — используются 4‑гидроксибензоат, 4‑аминофеназон, 4‑аминоантипирин.

Все эти методы весьма специфичны и хорошо воспроизводимы.

  1. Колориметрические методы, в основе которых лежат следующие цветные реакции:
  • реакция Биоля‑Крофта с использованием персульфата калия, уксусной и серной кислоты и с появлением красного окрашивания.
  • реакция Ригли, базирующаяся на взаимодействии холестерина с реактивом, в составе которого имеются метанол и серная кислота.
  • реакция Чугаева, в которой появляется красное окрашивание после реакции холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.
  • реакция Либермана‑Бурхарда, при которой холестерин окисляется в сильно кислой абсолютно безводной среде с образованием сопряженных двойных связей. В результате образуется соединение холестагексаена с концентрированной серной кислотой изумрудно‑зеленого цвета с максимумом абсорбции при 410 и 610 нм. Особенностью этой реакции является отсутствие стабильности окрашивания. В литературе можно встретить разное соотношение ингредиентов в реактиве Либерман-Бурхарда: чем выше содержание уксусного ангидрида, тем с большей скоростью протекает реакция. Протеканию реакции способствуют сульфосалициловая, паратолуенсульфоновая, диметилбензол‑сульфоновая кислоты. С эфирами холестерина реакция идет медленнее, чем со свободным холестерином, скорость возрастает при повышении температуры, свет оказывает разрушающее воздействие на продукты реакции. Все методы, основанные на реакции Либерман-Бурхарда, подразделяются на прямые и непрямые:
◊ к непрямым относятся методы Энгельгарда‑Смирновой, Раппопорта‑Энгельберга, Абеля и заключаются в предварительной экстракции холестерина из сыворотки с последующим определением его концентрации. Из этой группы методов наиболее известен метод Абеля с экстракцией свободного и этерифицированного холестерина изопропанолом или петролейным эфиром, гидролизом эфиров холестерина и последующей реакцией Либерман-Бурхарда. Методы этой группы более воспроизводимы и специфичны;
◊ в прямых методах (Илька, Мрскоса‑Товарека, Златкис‑Зака) холестерин предварительно не экстрагируется, а цветная реакция осуществляется непосредственно с сывороткой. Выявлено, что определение концентрации холестерина по Ильку при сравнении с методом Абеля дает более высокие (по разным авторам на 6%, на 10‑15%) значения, что необходимо учитывать при типировании гиперлипопротеинемий.
  • реакция Калиани‑Златкиса‑Зака, заключающаяся в появлении красно‑фиолетового окрашивания раствора при окислении холестерина хлорным железом в уксусной и концентрированной серной кислотах. Эта реакция в 4‑5 раз чувствительнее, чем реакция Либерман‑Бурхарда, но менее специфична.

Унифицированными методами являются колориметрические методы Илька и Калиани-Златкис-Зака.

Принцип

Основан на реакции Либерман‑Бурхарда: в сильно кислой среде в присутствии уксусного ангидрида происходит дегидратация холестерина с образованием окрашенного в зеленовато‑синий цвет бисхолестадиенилмоносульфоновой кислоты.

Нормальные величины

Сыворотка (указанный метод)0 ‑ 1 год1.81‑4.53 ммоль/л
до 20 лет

Источник: https://diabet-krov.ru/diagnostika/metody-opredeleniya-obshhego-holesterina-v-krovi.html

Что такое холестерин: как определить и снизить его концентрацию в крови

Методы определения холестерина

Питание

В специализированной литературе представлено много информации о вреде холестерола (ХЛ). В наше время стало модно контролировать его уровень в пищевых продуктах. Холестерин для большинства из нас ассоциируется с негативными явлениями. Но так ли вредно это на самом деле? Чтобы ответить на этот и другие вопросы, нужно выяснить, что такое холестерин и зачем он нам нужен.

Информация к сведению

С точки зрения биохимии, холестерин, или, как его еще принято называть, холестерол, – это природный, полициклический спирт, который относится к простым жирам (стеринам). Это соединение синтезируется в разных органах и тканях организма.

Холестерол входит в структуру жиров только животного происхождения. В продуктах растительного происхождения его нет.

В 1769 г. ученым удалось выделить ХЛ из желчных камней. Это вещество не растворялось в воде, однако оно хорошо это делало в жирах и растворителях органического происхождения. Лишь через 20 лет химикам удалось синтезировать это соединение в чистом виде.

Виды стеринов

Около 75 % холестерола связано с белками. Основная его часть находится в свободном состоянии.

Медики различают несколько разновидностей холестерола:

  • общий холестерин;
  • хиломикроны;
  • липопротеиды низкой плотности (ЛПНП);
  • липопротеиды высокой плотности (ЛПВН);
  • липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП).

Важно! Избыток ЛПНП в плазме приводит к развитию атеросклероза.

Значение холестерина

Вышеописанное вещество выполняет ряд функций:

  • входит в состав биомембран;
  • участвует в биосинтезе гормонов (тестостерон, альдостерон, эстроген, прогестерон);
  • структурный компонент желчи;
  • повышает иммунную резистентность организма;
  • является предшественником витамина D3;
  • регулирует синтез глюкокортикоидов.

Совет. Люди возрастом от 20-25 лет должны регулярно сдавать кровь на биохимию. Только в таком случае можно контролировать уровень ХЛ в организме человека.

При гиперхолестеринемии (повышенный уровень ХЛ в крови) в организме возникают следующие явления:

  • сужение просвета сосудов;
  • повреждение эндотелия артерий;
  • ишемическая болезнь;
  • образование бляшек;
  • инфаркт;
  • тромбоэмболия;
  • инсульт;
  • стенокардия.

Этиология гиперхолестеринемии

Медики выделяют ряд факторов, которые способствуют повышению уровня ХЛ в крови:

  • регулярные стрессы;
  • сахарный диабет;
  • генетическая предрасположенность;
  • малоактивный образ жизни;
  • обструктивные печеночные патологии;
  • несбалансированный рацион;
  • бесконтрольный прием некоторых лекарств (β-блокаторы, диуретики, анаболические стероиды, некоторые иммунодепрессанты);
  • чрезмерное увлечение фаст-фудом;
  • пристрастие к табаку и алкоголю;
  • гипотиреоз;
  • артериальная гипертензия;
  • нефротический синдром;
  • ожирение.

Симптоматика болезни

Обнаружить гиперхолестеринемию можно только лабораторным путем. Как правило, при незначительном повышении ХЛ симптоматика отсутствует. Признаки патологии проявляются только в сильно запущенных случаях.

Основные признаки недуга:

  • Ксантелазмы. Отложения ХЛ под кожу век в виде плоских желтых узелков.
  • Ксантомы. Новообразования, в которых содержится холестерин. Чаще всего такие узелки формируются над сухожилиями.
  • Липоидные новообразования вокруг роговицы. Чаще всего холестериновые ободки наблюдаются у пациентов старше 50. Они могут указывать на наличие генетически обусловленной гиперхолестеринемии.

Признаки поражения органов наблюдаются при развитии атеросклероза вследствие гиперхолестеринемии.

Очень важно контролировать уровень ХЛ в плазме, так как существует высокий риск развития разных заболеваний, связанных с функционированием сосудов и сердца. Нормы содержания ХЛ в плазме представлены в таблице.

Снизить уровень стеринов в крови можно с помощью диеты и физупражнений. Если указанные действия малоэффективны, тогда врачи назначают медикаментозную терапию.

Александр Юрьевич Шишонин – главный врач «Клиники доктора Шишонина», кандидат мед. наук, специалист в области лечения сердечно-сосудистых патологий, развенчивает миф о вредности холестерина в организме человека.

Он утверждает, что ХЛ – это не жир и бояться его не стоит. Многие читатели уверены в том, что если в своем рационе снизить уровень жира, то в сосудах не будут образовываться атеросклеротические бляшки.

Это не совсем так.

При злокачественном течении атеросклероза он прописывает диету с высоким содержанием качественных молочных жиров. Доктор объясняет, что холестерол в переводе с древнегреческого языка – «твердая желчь».

В состав желчи входит несколько холиевых кислот. В кишечнике первичные холиевые кислоты с участием микрофлоры трансформируются во вторичные кислоты. Поэтому нам так важна здоровая микрофлора кишечника, без нее жить мы не сможем. В монографии А.Ю. Шишонина «Кибержизнь» указано, как победить атеросклероз. Многие доктора называют это заболевание тихим убийцей.

Совет! Шишонин рекомендует не расстраиваться, если у вас много «плохого» холестерина, потому как в большинстве случаев нарушение метаболических процессов не является чем-то очень плохим. Так или иначе для того, чтобы разобраться с биохимическими процессами, протекающими в организме, нужно обратиться к опытному доктору (терапевту, кардиологу, эндокринологу).

Уровень ХЛ в крови в первую очередь обусловлен возрастным фактором. У молодых людей стеринов в организме много, так как они быстро растут и развиваются, а для этого необходима клеточная масса, богатая холестерином.

Несколько лет назад ВОЗ установила норму холестерина 5,5 ммоль/л, сейчас уже – 5,2 ммоль/л. Учитывая интенсивное развитие фармацевтической промышленности, через несколько лет норма будет уже 4 ммоль/л. Все это делается для того, чтобы пораньше назначать статины.

В 2000-2001 годах для пациентов старше 60 уровень ХЛ в крови считался нормальным в 6,8-7,8 ммоль/л. К сожалению, все поводы по назначению статинов по рекомендации ВОЗ становятся все более весомыми, однако сосудистого здоровья это человечеству не принесло.

Важно! Шишонин отмечает, что, если у человека уровень ХЛ 9 ммоль/л, это не так уж и страшно. Это лишь информация о том, что у вас активировался синтез ХЛ и организму нужна физнагрузка. Холестерин идет на синтез новых клеток, за счет которых вы себя регенерируете. Используйте стерины для себя как лекарство во благо своего здоровья.

Профилактика

При стабильно высоком уровне ХЛ в крови врачи рекомендуют придерживаться нескольких правил:

  • нормализовать массу тела;
  • снизить уровень триглицеридов в рационе;
  • отказаться от спиртного и табака;
  • не нервничать;
  • стабилизировать уровень сахара в крови;
  • устранить гипертонию.

Клубом Бывших Гипертоников доктора Шишонина давно доказано, что при выполнении некоторых физических упражнений можно снизить уровень стеринов в крови. Хорошие результаты получают при приседании (200-250 раз в день).

Заключение

Уровень стеринов в плазме нужно постоянно контролировать. При превышении их уровня необходимо принимать эффективные меры нормализации. Только в таком случае получится избежать многих проблем со здоровьем.

Источник: https://doctor-shishonin.ru/articles/nutrition/chto-takoe-kholesterin-kak-opredelit-i-snizit-ego-kontsentratsiyu-v-krovi/

Анализ крови на холестерин — как правильно подготовиться

Методы определения холестерина

Даже люди, далёкие от медицины, наслышаны о таком заболевании, как атеросклероз. Оно развивается у каждого пятого жителя планеты и связано с нарушениями жирового обмена организма.

Атеросклероз имеет множество клинических проявлений: головную боль и головокружение, нарушение процессов запоминания и концентрации внимания, зябкость и онемение конечностей, периодические боли в сердце.

Несмотря на это, симптомы заболевания часто игнорируются пациентами, и нарушения липидного обмена диагностируются только после сдачи анализа крови на холестерин. Это важное диагностическое обследование поможет понять общую картину состояния обмена жиров в организме, и вовремя принять меры по устранению заболевания.

Рассмотрим, что может показать биохимическое исследование, как правильно сдать кровь на фракции, особенности липидограммы, и на что нужно обратить внимание при расшифровке анализа.

Холестерин и его фракции: биологическая роль в организме

Холестерин (холестерол) по своей химической структуре является жирным спиртом. Большая его часть (70-80%) синтезируется в клетках печени и носит название эндогенного, небольшое количество (20-30%) поступает вместе с пищей.

Биологическая роль этого вещества в организме огромна: входит в состав биоплазматических мембран клеток, придавая им жесткость и упругость, является их стабилизатором; регулирует проницаемость клеточных стенок; участвует в синтезе стероидных гормонов, вырабатываемых надпочечниками; служит основой для образования желчных кислот – активных участников пищеварительного процесса; выстилает нервные волокна для их защиты и лучшей проводимости; защищает клетки крови от действия повреждающих веществ и гемолитической ядов.

Так как этот жирный спирт нерастворим в воде, по кровеносному руслу он перемещается в составе специальных белков-переносчиков – аполипопротеинов. В зависимости от плотности к холестерину выделяют несколько типов липопротеинов:

  1. Хиломикрон – самая низкомолекулярная фракция, содержащая до 85% триглицеридов и небольшого количества холестерина. Эти крупные жировые скопления с трудом продвигаются по сосудам и с легкостью оседают на их внутренней стенке.
  2. ЛПОНП – липопротеиды очень низкой плотности – наряду с хиломикронами относятся к триглицерид-богатой фракции жиров в организме.
  3. ЛПНП – липопротеиды низкой плотности – наиболее атерогенный класс жиров, образующихся из ЛПОНП в результате липолиза. Часто называется «плохим» холестерином из-за способности откладываться на внутренней стенке сосудов и образовывать атеросклеротические бляшки.
  4. ЛПВП – липопротеиды высокой плотности – наиболее мелкие жировые частицы, в которых содержание белка намного превышает концентрацию холестерина. Из-за антиатерогенных свойств и способности очищать сосуды от бляшек ЛПВП получил название «хорошего» холестерина.

Таким образом, ЛПОНП и ЛПНП обеспечивают транспорт холестерина из печени на периферию. Именно повышение их концентрации приводит к отложению холестерина на стенках сосудов и образованию атеросклеротических бляшек. ЛПВП в свою очередь переносит жировые клетки в печень для дальнейшей утилизации. При атеросклерозе наблюдается снижение этой фракции.

Хиломикроны в организме здорового человека отсутствуют и образуются только при нарушениях жирового обмена.

Подготовка к лабораторному исследованию крови

Как правильно сдать анализ крови на холестерин, чтобы он был максимально достоверен? Конечно, во многом результат зависит от качества техники, используемой в лаборатории. Но и состояние пациента может повлиять на итоги обследования.

Специальная подготовка не проводится, однако врачи отмечают необходимость выполнения следующих рекомендаций:

  1. Сдавайте анализ утром натощак: с 8 до 10 часов все биохимические процессы в организме протекают более активно.
  2. Не принимайте пищу в течение 10-12 часов перед обследованием: важно, чтобы последний прием пищи накануне вечером был не позднее 20 часов. Оптимально, если ужин придется на 18-19 часов.
  3. Если утром в день обследования хочется пить, разрешена только простая вода (без газа и добавок).
  4. Питайтесь, как обычно на протяжении двух недель перед сдачей крови: нет нужды соблюдать определенную диету, так как результат обследования будет недостоверным.
  5. Не употребляйте алкоголь, как минимум за сутки до похода в лабораторию.
  6. Не курите по крайней мере за 60 минут до анализа.
  7. Желательно исключить изнуряющие физические нагрузки и психоэмоциональное переживания за сутки до исследования.
  8. Если в поликлинику вы шли быстрым шагом, или вам пришлось подниматься по лестнице, перед забором крови рекомендуется присесть на 10-15 минут и успокоиться.
  9. Если в этот день у вас также запланированы другие диагностические мероприятия и манипуляции (рентген-обследование, УЗИ, посещение врача), лучше провести их после сдачи крови на анализ.
  10. Обязательно предупредите своего лечащего врача, если вам приходится постоянно принимать какие-либо медикаменты. Специалист расскажет, как подготовиться к анализу в этом случае и будет учитывать действие препаратов при интерпретации результатов обследования.

Биохимический анализ крови: основные показатели здоровья

Биохимический анализ – доступный метод комплексной диагностики проблем человеческого организма, во время которого определяются основные показатели белкового, жирового и углеводного обменов, а также оценка функционирования внутренних органов.

Для исследования у человека берется 2-5 мл венозной крови. Затем биоматериал маркируется соответствующим образом и отправляется в лабораторию для анализа.

  • Определение холестерина. В ходе биохимического анализа крови определяется только концентрация общего холестерина – суммарное отражение всех его фракций. В норме его уровень колеблется в зависимости от возраста и пола человека, но в среднем составляет 3,2-5,6 ммоль/л. Повышение уровня холестерина в организме – серьезная угроза, провоцирующая развитие атеросклероза и других обменных нарушений.
  • Общий белок крови. Общий белок – еще один суммарный показатель, отражающий состояние белкового обмена. В ходе обследования подсчитывается общее число белков в составе всех фракций.  Нормальные значения анализа – 66-83 г/л. При снижении общего белка в организме можно заподозрить серьезные нарушения в работе печени и почек. Повышение его концентрации часто свидетельствует о воспалении. Уровень белка также может влиять на развитие атеросклероза, так как это вещество участвует в транспорте молекул холестерина по сосудистому руслу.
  • Мочевина и креатинин. Эти показатели рассматриваются совместно и отражают работу почек в организме. Норма мочевины – 2,5-8,3 ммоль/л, креатинина – 44-106 мкмоль/л. Однако их повышение наблюдается не только при пиелонефрите, гломерулонефрите или хронической почечной недостаточности, но и при нарушенном липидном обмене. Увеличение концентрации креатинина и мочевины при отсутствии заболеваний почек могут говорить об атеросклерозе.

Способы измерения в сыворотке крови

Помимо биохимического анализа существует несколько способов измерения уровня холестерина в крови. Рассмотрим их особенности и сферу применения.

Портативный биохимический анализатор – экспресс-метод диагностики

Определение концентрации холестерина с помощью портативного биохимического анализатора – самый быстрый и удобный метод диагностики нарушений липидного обмена.

Анализатор представляет собой небольшой прибор, работающий на батарейках. В комплекте с ним поставляются специальные тест-полоски, которые используются для измерения: холестерина, триглицеридов, глюкозы, молочной кислоты.

 Процедура теста очень проста: медицинский работник или пациент прокалывает кончик безымянного пальца ланцетом и аккуратно подносит к капельке крови кончик тест-полоски, вставленной в прибор. Через 180 секунд уже готов результат, который высвечивается на большом дисплее.

Удобно, что прибор сохраняет более 100 предыдущих результатов для контроля течения заболевания.

Анализ на холестерин с помощью портативного анализатора обычно проводится при скрининговых профилактических осмотрах, в доврачебных кабинетах поликлиник и для экспресс-диагностики острых состояний.

Преимущества метода: возможность прибора измерять холестерин в домашних условиях; малая инвазивность, для обследования необходима лишь небольшая капля крови; удобство использования; не требуется калибровки реагента; высокая точность измерений. Недостатки метода: высокая стоимость анализатора, вероятность погрешности при неправильном использовании.

Лабораторные методы определения

На сегодняшний день существует несколько способов определения холестерина в лаборатории. С помощью них можно определить точное содержание холестерина в сыворотке крови. Хотя эти методы диагностики занимают больше времени (как правило, 1-2 суток), по достоверности они превосходят данные, полученные на портативном биохимическом анализаторе.

  • Способ Златкиса-Зака. Метод Златкиса-Зака позволяет определить концентрацию общего холестерина, как свободного, так и связанного с белками плазмы. В комплект реагентов входит: серная (H2SO4) кислота, уксусная кислота, хлорное железо, фосфатная кислота. В смесь этих веществ добавляется сыворотка крови. После химической реакции окисления сыворотка приобретает один из оттенков красного – от ярко-морковного до насыщенного бордового. Оценка результатов проводится с помощью специальной фотометрической шкалы. Норма холестерина, определенного, по методу Златкиса-Зака – 3,2-6,4 ммоль/л.
  • Способ Илька. Это исследование уровня холестерина также основано на взаимодействии сыворотки крови и смеси органических и неорганических кислот: концентрированной серной, ледяной уксусной, уксусного ангидрида. Реакция Илька считается потенциально опасной из-за высокой концентрации кислот, поэтому может проводиться только в лаборатории химиком или врачом-лаборантом. Норма холестерина, определенного по методу Илька – 4,6 5-6,45 ммоль/л.
  • Способ определения холестерина с использованием прибора «Новохол». Данный метод предполагает использование вместо кислот более безопасных веществ: холестеролэстеразы, холестеролоксидазы, пероксидазы, аминоантипирина. В ходе последовательных химических реакций, включающих расщепление связей и превращение всего холестерина сыворотки крови в свободный, происходит его взаимодействие с аминоантипирином. Норма вещества зависит от реагентов конкретной лаборатории, а также пола и возраста больного.

Измерение уровня свободного холестерина

Для полной диагностики некоторым пациентам помимо общего назначается определение свободного холестерина. Несмотря на незначительную концентрацию в сыворотке крови, именно эта фракция жирного спирта наиболее атерогенна и становится причиной образования бляшек на внутренней стенке сосудов.

Для проведения анализа специалист экстрагирует весь холестерин из сыворотки крови с помощью этилового спирта. Затем, используя различный набор реагентов (томатин, дигитонин, пиридинсульфат), свободный холестерин переводится в осадок, и определяется его количество. Норма анализа – 1,04-2,33 ммоль/л.

Липидограмма – расширенный анализ жирового обмена

Липидограмма – комплексное обследование обмена холестерина в организме, позволяющее одновременно оценить концентрацию всех его фракций, а также предположить о наличии или отсутствии риска развития атеросклероза.

  • Общий холестерин. Исследование проводится по одному из способов, указанных выше. Как сдавать кровь на холестерин, в каждом конкретном случае определяет врач. Этот показатель отражает содержание как свободного, так и связанного с липопротеинами жирного спирта. Увеличение его уровня может свидетельствовать об ишемических заболеваниях сердца, сосудистой церебральной патологии. При снижении уровня холестерина, которое встречается реже, можно предположить недостаточное поступление животных жиров в организме или любые проблемы с печенью.
  • Липопротеины низкой плотности. Их концентрацию определяют путем анализа оседающего содержимого сыворотки крови в результате химической реакции с пиридинсульфатом. Норма анализа — ≤ 3,9 ммоль/л. Превышение этих значений является лабораторным показателем атеросклероза.
  • Липопротеины высокой плотности. Подсчет фракции «хорошего» холестерина обычно производится вычитанием из общего холестерина низкомолекулярных фракций. Его определение необходимо для полной диагностики обменных нарушений в организме. Норма анализа — ≥ 1,42 ммоль/л у женщин и ≥ 1,68 ммоль/л у мужчин. При дислипидемиях наблюдается снижение этих показателей.
  • Триглицериды и ЛПОНП. Существует несколько методов определения триглицеридов и ЛПОНП в сыворотке крови. Самые популярные из них связаны с ферментативными химическими реакциями, основанными на действии: ацетилацетона, хромотроповой кислоты, глицерола. По увеличению триглицеридов и состоящих из них ЛПОНП выше нормы (0,14-1,82 ммоль/л) судят о высоком риске атеросклероза, сердечно-сосудистых и церебральных осложнений.
  • Коэффициент атерогенности. Коэффициент атерогенности – относительная величина, позволяющая судить о рисках развития атеросклеротической болезни у конкретного пациента. В ее основе лежит определение соотношения между «хорошими» и «плохими» фракциями холестерина.КА = (ОХ – ЛПВП) / ЛПВП, где КА – Коэффициент атерогенности, а ОХ – общий холестерин. В норме КА не должен превышать показатель 3.

Таким образом, комплексное исследование липидного обмена позволит оценить состояние организма и предположить причину атеросклероза.

Всем здоровым людям старше 40 лет рекомендуется сдавать анализ на общий холестерин по крайней мере 1 раз в 2 года. При атеросклерозе и других патологиях для контроля лечения исследование можно проводить гораздо чаще.

Источник: https://holesterinstop.ru/vse-o-xolesterine/analiz-krovi-na-holesterin.html

Общий холестерин и его фракции

Методы определения холестерина

Холестерин — одноатомный спирт, в молекуле которого имеется ядро циклопентанпергидрофенатрена.

Он является компонентом клеточных мембран, предшественником при синтезе желчных кислот, стероидных гормонов (глюкокортикоидов, альдостерона, половых гормонов), витамина D, обнаруживается во всех тканях и жидкостях организма как в свободном состоянии, так и в виде эфиров с жирными кислотами, преимущественно с линолевой (около 10% всего холестерина). Синтез холестерина происходит во всех клетках организма. Основными транспортными формами в крови являются α‑, β‑ и преβ‑липопротеины (или, соответственно, липопротеины высокой, низкой и очень низкой плотности). В плазме крови холестерин находится главным образом в форме сложных эфиров (60‑70%). Эфиры образуются либо в клетках в реакции катализируемой ацил-КоA-холестерин-ацилтрансферазой, использующей в качестве субстрата ацил‑КоA, либо в плазме в результате работы фермента лецитин-холестерин-ацилтрансферазы, осуществляющей перенос жирной кислоты со второго атома углерода фосфатидилхолина на гидроксильную группу холестерина. В плазме крови главными источниками холестерина и фосфатидилхолина для реакции служат липопротеины высокой и низкой плотности, этим путем образуется большая часть эфиров холестерина плазмы.

Для определения содержания холестерина в крови используют следующие методы:

  1. Титрометрические.
  2. Гравиметрические.
  3. Нефелометрические.
  4. Тонкослойная и газожидкостная хроматография.
  5. Полярографические методы, позволяют определять общий и свободный холестерин в присутствии ферментов холестеролоксидаз и холестеролэстераз.
  6. Флюориметрия по реакции с о‑фталевым альдегидом и другими реактивами.
  7. Ферментативные методы — определение протекает в одной пробирке, но в несколько этапов: ферментативный гидролиз эфиров холестерина, окисление холестерина кислородом воздуха с образованием холест‑4‑ен‑3‑ола и перекиси водорода. В качестве ферментов применяются холестеролоксидаза, холестеролэстераза, пероксидаза, каталаза. Ход реакции можно регистрировать:
  • спектрофотометрически по накоплению холестенола.
  • по убыли кислорода в среде.
  • по изменению окраски раствора, в качестве хромогенов — индикаторов протекания реакций — используются 4‑гидроксибензоат, 4‑аминофеназон, 4‑аминоантипирин.

Все эти методы весьма специфичны и хорошо воспроизводимы.

  1. Колориметрические методы, в основе которых лежат следующие цветные реакции:
  • реакция Биоля‑Крофта с использованием персульфата калия, уксусной и серной кислоты и с появлением красного окрашивания.
  • реакция Ригли, базирующаяся на взаимодействии холестерина с реактивом, в составе которого имеются метанол и серная кислота.
  • реакция Чугаева, в которой появляется красное окрашивание после реакции холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.
  • реакция Либермана‑Бурхарда, при которой холестерин окисляется в сильно кислой абсолютно безводной среде с образованием сопряженных двойных связей. В результате образуется соединение холестагексаена с концентрированной серной кислотой изумрудно‑зеленого цвета с максимумом абсорбции при 410 и 610 нм. Особенностью этой реакции является отсутствие стабильности окрашивания. В литературе можно встретить разное соотношение ингредиентов в реактиве Либерман-Бурхарда: чем выше содержание уксусного ангидрида, тем с большей скоростью протекает реакция. Протеканию реакции способствуют сульфосалициловая, паратолуенсульфоновая, диметилбензол‑сульфоновая кислоты. С эфирами холестерина реакция идет медленнее, чем со свободным холестерином, скорость возрастает при повышении температуры, свет оказывает разрушающее воздействие на продукты реакции. Все методы, основанные на реакции Либерман-Бурхарда, подразделяются на прямые и непрямые:
◊ к непрямым относятся методы Энгельгарда‑Смирновой, Раппопорта‑Энгельберга, Абеля и заключаются в предварительной экстракции холестерина из сыворотки с последующим определением его концентрации. Из этой группы методов наиболее известен метод Абеля с экстракцией свободного и этерифицированного холестерина изопропанолом или петролейным эфиром, гидролизом эфиров холестерина и последующей реакцией Либерман-Бурхарда. Методы этой группы более воспроизводимы и специфичны;
◊ в прямых методах (Илька, Мрскоса‑Товарека, Златкис‑Зака) холестерин предварительно не экстрагируется, а цветная реакция осуществляется непосредственно с сывороткой. Выявлено, что определение концентрации холестерина по Ильку при сравнении с методом Абеля дает более высокие (по разным авторам на 6%, на 10‑15%) значения, что необходимо учитывать при типировании гиперлипопротеинемий.
  • реакция Калиани‑Златкиса‑Зака, заключающаяся в появлении красно‑фиолетового окрашивания раствора при окислении холестерина хлорным железом в уксусной и концентрированной серной кислотах. Эта реакция в 4‑5 раз чувствительнее, чем реакция Либерман‑Бурхарда, но менее специфична.

Унифицированными методами являются колориметрические методы Илька и Калиани-Златкис-Зака.

Медицинская биохимия, принципы измерительных технологий в биохимии, патохимия, диагностика, биохимия злокачественного роста. Часть 2

Методы определения холестерина

Методы определения содержания холестерина сыворотки крови

фото Методы определения содержания холестерина сыворотки кровиМетоды определения общего холестерина подразделяются на:

1) колориметрические. Насчитывается около 150 колориметрических методов, основывающихся на реакциях образования цветных комплексов;

2) нефелометрические методы, основанные на сравнении степени мутности стандартного и исследуемого раствора;

3) титрометрические методы;

4) флюориметрические методы, позволяющие определять холестерин в микрообъемах сыворотки крови (например, в 0,01 мл ее);

5) газохроматографические и хроматографические методы;

6) гравиметрические методы.

Метод определения общего холестерина в сыворотке крови, основанный на реакции Либермана—Бурхарда (метод Илька)

Принцип метода

В сильнокислой безводной среде ХС взаимодействует со смесью серной, уксусной кислот и уксусного ангидрида. В ходе реакции ХС последовательно окисляется. При этом каждая стадия реакции сопровождается образованием молекулы ХС, которая имеет на одну двойную связь больше, чем соединение, из которого она образовалась. 

В результате конечного окисления иона 3,5-холестодиена получается окрашенное соединение, растворенное в серной кислоте и дающее максимум абсорбции при 410 и 610 нм. Из-за неустойчивости окраски соединения время фотометрирования должно быть точно выдержано.

Реакционная смесь со стандартным раствором ХС имеет изумрудный цвет. Однако пробы сыворотки могут давать зеленый, голубой, бурый цвета. Это связано с тем, что в результате образования эндогенного тепла в реакцию вступают многие компоненты сыворотки крови.

Кроме того, в реакции Либермана—Бурхарда свободный ХС и его эфиры образуют цветные комплексы с разным коэффициентом молекулярного поглощения. В случае высокого содержания эфиров ХС оптическая плотность оказывается более высокой.

Поскольку на прямое определение ХС влияют многие факторы, реакцию ХС со смесью Либермана—Бурхарда нельзя считать специфичной.

Прямой метод определения ХС относительно прост в исполнении и недорог. Однако токсичность и способность вызывать коррозию системы в современных анализаторах ограничивают применение метода. В крупных лабораториях предпочтение отдают ферментативным методам определения ХС.

Референтные величины: холестерин 4,65—6,46 ммоль/л (180—250 мг/дл).

При концентрации холестерина в пробе выше 16 ммоль/л сыворотку разводят физиологическим раствором в соотношении 1 : 1 (результат).

Реакция чувствительна на изменение температуры, поэтому необходимо особенно соблюдать охлаждение реакционной смеси после добавки серной кислоты.

Билирубин в концентрации выше 50 мкмоль/л влияет на результат анализа. 

Интерференцию билирубина можно исправить расчетом. 17 мкмоль/л билирубина приводит к завышению содержания холестерина в сыворотке примерно на 0,1 моль/л.

Сыворотка должна быть негемолизированной.

Необходимые реактивы

1. Ледяная уксусная кислота.

2. Концентрированная серная кислота.

3. Уксусный ангидрид.

4. Абсолютный этиловый спирт.

5. Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты. Смесь должна быть бесцветной или слегка желтоватой. Хранить в холодильнике в темной склянке с притертой пробкой.

6. Калибровочный раствор: 232 мг холестерина растворяют в 2—3 мл хлороформа и доводят до объема 100 мл абсолютным этиловым спиртом. Приготовленный раствор содержит холестерин в концентрации 6 ммоль/л.

Ход определения

К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без признаков гемолиза, перемешивают встряхиванием и ставят на 20 мин в термостат или водяную баню при температуре 37 °С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см против реактива при длине волны 625 нм.

Построение калибровочной кривой и расчет. 

К 0,05—0,2 мл калибровочного раствора добавляют такое количество кислотной смеси, чтобы общий объем был 2,2 мл, перемешивают и выдерживают 20 мин при температуре 37 °С, так же как и опытные пробы, а затем фотометрируют. Окраска калибровочной пробы, в которую взято 0,05 мл калибровочного раствора, соответствует содержанию холестерина в плазме 3 ммоль/л, пробы, в которую взято 0,1 мл, — содержанию 6 ммоль/л и т.д.

Примечания

1. Попадание воды приводит к помутнению раствора.

2. Следы гемолиза или желтушность исследуемой плазмы или сыворотки служат причиной завышенных результатов.

3. Можно использовать для фотометрии и кюветы с длиной оптического пути 1 см, тогда количество кислотной смеси удваивают, а количество исследуемого материала остается прежним.

Метод определения содержания холестерина в сыворотке крови, основанный на холестеролоксидазной реакции

Принцип метода

Холестерин и его эфиры выделяются из липопротеинов детергентами. Холестеринэстераза гидролизует эфиры. В результате последующего ферментативного окисления холестерина холестериноксидазой образуется Н2О2.

Эфир холестерина + Н2О2 ↔ холестерин + жирные кислоты;

Холестерин + О2 ↔ холестен-3-ОН + Н2О2;

Н2О2 + n-хлорфенол + 4-аминоантипирин ↔ хинониминовый краситель + Н2О2.

Уровни нормы ХС, выявленные при обследовании “в целом здорового населения”, относительно высоки. С точки зрения риска развития ишемической болезни сердца уровни ХС желательны:

1) рекомендуемый — менее 5,18 ммоль/л;

2) умеренный риск — 5,18—6,19 ммоль/л;

3) высокий риск — более 6,22 ммоль/л.

Клинико-диагностическое значение

Увеличение концентрации ХС наблюдается при полигенной гиперлипопротеидемии типа II А и II Б, III, гиперлипопротеидемии I, IV, V типов, вторичной, приобретенной гиперлипопротеидемии, отмечается также при заболеваниях печени, внутри- и внепеченочном холестазе, гломерулонефрите, нефротическом синдроме, ХПН, злокачественных опухолях поджелудочной железы, простаты, гипотиреозе, подагре, ИБС, беременности, диабете, алкоголизме, анальбуминемии, дисглобулинемии, острой перемежающейся порфирии.

Снижение концентрации холестерина обнаружено при дефиците α-липопротеида (болезнь Танжера), гипо- и а-β-липопротеидемии, некрозе печеночных клеток, злокачественных опухолях печени, гипертиреозе, нарушении всасывания, нарушении питания, мегалобластной анемии, сидеробластной анемии, талассемии, острых тяжелых заболеваниях, обширных ожогах, хронических обструктивных заболеваниях легких, умственной отсталости, ревматоидном артрите, лимфангиоэктазии кишечника.

Отмечены сезонные колебания уровня ХС, более высокие осенью и зимой, более низкие весной и летом. Повторное определение ХС после инфаркта миокарда необходимо проводить через три месяца.

Метод определения содержания липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови

Липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и низкой плотности (ЛПНП) в противоположность липопротеинам высокой плотности (ЛПВП) образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α-холестерин или ЛПВП.

Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9—1,9 ммоль/л.

Принцип метода

Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) и ЛПНП (липопротеины низкой плотности) осаждаются добавлением фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния.

После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП (липопротеины высокой плотности) — фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.

Полученные значения достоверны, если:

1) в пробе нет хиломикронов;

2) концентрация триацилглицеридов не превышает 400 мг/100 мл;

3) в пробах не обнаруживается следов III типа дислипопротеинемии.

При измерении на Hg 546 нм происходит завышение количества ЛПВП холестерина спектром поглощения гемоглобина, которое можно игнорировать при значениях до 200 мг Нb/100 мл.

Полученный при центрифугировании супернатант должен быть прозрачен. Если проба содержит большое количество триглицеридов (более 1000 мг/100 мл), осаждение липопротеинов может быть неполным (мутный супернатант) или часть осадка может плавать на поверхности. В этих случаях развести образец 1 : 1 0,9%-ным раствором NaCl и повторить осаждение.

Клинико-диагностическое значение ХС-ЛПВП

Эпидемиологические исследования показали обратную зависимость между уровнями ХС-ЛПВП и распространенностью ИБС. Определение ХС-ЛПВП способствует выявлению риска развития ИБС.

Повышению уровня ХС-ЛПВП способствуют такие заболевания, как первичный билиарный цирроз, хронический гепатит, алкоголизм, прочие хронические интоксикации.

    • Цель: научиться на основе современных представлений о путях обмена простых белков и аминокислот применять лабораторные методы диагностики для оценки его состояния и выявления нарушений в клинической практике

    • 6. Проверка остаточных знаний по общей биохимии Тест
    • Вопросы для обсуждения на занятии Страница
    • 6 Словарь 5гр Глоссарий
    • 6 Тест аминокислоты, белки
    • NAMPT Страница
    • Цель: сформировать представление о биохимических процессах, лежащих в основе сохранения и реализации биологической информации, фолдинге и деградации белков. Ознакомиться с клинико-диагностическим значением исследования белкового состава плазмы крови, заложить основы понимания принципов энзимодиагностики

    • Вопросы для обсуждения на занятии Страница
    • Клинический электрофорез сывороточных белков Страница
    • Глоссарий 2 гр.
    • 8 Словарь 5гр Глоссарий
    • Цель: ознакомиться с функциональной биохимией и морфологией  печени, ее ролью в липидном, углеводном и белковом обменах.  Освоить методы оценки функционального состояния печени и изучить основные клинико-лабораторные синдромы ее поражения

    • Вопросы для обсуждения на занятии Страница
    • Морфофункциональная гепатология Книга
    • Задача №1 Задание
    • Задача №2. Задание
    • Задача №3. Задание
    • Задача№4 Задание
    • Задача №5. Задание
    • Задача №6 Задание
    • Задача №7 Задание
    • Задача №8. Задание
    • Тестирование (метаболизм печени)

      категории 09.09. и 6-а (из мед.бх_3)

    • 9 Словарь 5гр. Глоссарий
    • Цель: закрепить знания по физико–химическим свойствам и составу крови, её функции; особенностям метаболизма эритроцитов; синтеза и функции гемоглобина. Сформировать представление о механизмах изменения физико-химических констант крови в норме и при патологии

    • Проверка остаточных знаний (Биохимия крови) Тест
    • Вопросы для обсуждения на занятии Страница
    • Биохимия крови Книга
    • Тест по материалам данного занятия
    • 10 Словарь 5гр. Глоссарий
    • Популяции лейкоцитов. Заполнить таблицу Задание
    • Цель: ознакомиться с особенностями метаболизма соединительной ткани, биохимической основой ее функционирования в норме и при различных патологических состояниях

    • Проверка остаточных знаний (соединительная ткань) Тест
    • Вопросы Страница
    • 11 Словарь 5гр Глоссарий
    • Биомаркеры повреждения соединительной ткани Книга
    • Цель: ознакомиться с особенностями метаболизма нервной ткани, биохимической основой ее функционирования. Сформировать представление об особенностях метаболизма мышечной ткани в условиях физических тренировок и утомления

    • Вопросы Страница
    • 12 Словарь гр5 Глоссарий
    • ХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ВОЗНИКНОВЕНИЯ И ПРОВЕДЕНИЯ НЕРВНЫХ ИМПУЛЬСОВ Книга
    • Введение в нейробиологию Книга

    • Цель: ознакомиться с особенностями метаболизма почек и биохимической основой их основных функций в норме и при патологии. Научить определять основные физико-химические параметры мочи в норме и при патологии

    • Вопросы Страница

Пропустить Навигация Пропустить Пользователи на сайте

Пропустить Поиск по форумам Пропустить Предстоящие события Пропустить Последние действия

Со времени Вашего последнего входа ничего не произошло

Page 3

Пропустить Навигация Пропустить Пользователи на сайте

Источник: https://edu.volgmed.ru/mod/page/view.php?id=3540

Медицина
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: